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荧光PCR扩增仪的工作原理和特点
更新时间:2023-07-19   点击次数:1088次
  荧光PCR扩增仪是一种常用的实验仪器,用于检测和分析聚合酶链反应(PCR)的过程和结果。其工作原理基于PCR技术,但在反应过程中引入了荧光探针,使得扩增结果可以实时监测和定量分析。
 
  一、工作原理:
 
  PCR反应体系准备:将待扩增的DNA模板、引物、荧光标记的探针等组分加入PCR反应管中。
 
  反应条件设定:设置所需的PCR循环参数,如温度、时间等。
 
  热循环:PCR扩增仪通过控制加热模块中的温度,实现PCR循环的不同阶段,包括变性、退火和延伸。 a. 变性:将DNA模板变性为单链,通常在高温下进行。 b. 退火:引物与目标DNA序列互补结合,通常在较低的温度下进行。 c. 延伸:DNA聚合酶在适当温度下通过引物将DNA模板复制,合成新的DNA链。
 
  荧光信号检测:仪器配备了荧光探测器,可实时监测扩增过程中的荧光信号。 a. 荧光探针:仪器中使用的探针通常是带有荧光染料和荧光抑制剂的两个或多个碱基的寡核苷酸序列。在PCR过程中,如果目标序列与引物匹配,则荧光探针会被切割,释放出荧光信号。 b. 荧光信号检测:扩增过程中,荧光PCR扩增仪实时监测荧光信号的强度。强度与目标序列的数量成正比,可以通过荧光信号的变化曲线来定量分析PCR结果。
荧光PCR扩增仪
 
  二、特点:
 
  实时监测:可以实时监测PCR过程中的荧光信号变化,提供即时的扩增结果分析。
 
  定量分析:通过荧光信号的强度,可以对PCR扩增过程中的目标序列进行定量分析,如测定起始模板的数量。
 
  高灵敏度:仪器对荧光信号具有高灵敏度,能够检测到微量的目标序列。
 
  高特异性:由于采用了引物和荧光探针的设计,仪器仪对目标序列具有高特异性,可以准确检测目标序列的扩增。
 
  自动化操作:现代的荧光PCR扩增仪通常具有自动化的功能,可以进行多个样品的批量处理,提高实验效率。
 
  数据分析软件:仪器通常配备了数据分析软件,可以对扩增结果进行曲线分析、图像导出等进一步的数据处理。
 
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